Termékek

Fluoreszcein és fluoreszcein-metil-észter monogalaktopiranozidjai: szintézis, enzimatikus hidrolízis biotinilált β-galaktozidázzal és transzlációs diffúziós együttható meghatározása

Fluoreszcein monoglikozidokat (d-galaktopiranozid (FMG) és d-glükopiranozid) és metil-észterüket (MFMG) állítottam elő acetobromoglükóz/galaktóz és fluoreszcein-metil-észterből jó kitermeléssel.A galakto származékok enzimatikus hidrolízises kísérleteit (biotinilált β-galaktozidázzal) végeztük, és kinetikai paramétereket számítottunk.A hidrolízis során a fluoreszcencia intenzitás 15-20-szoros növekedését figyelték meg.A fluoreszcencia lineáris növekedését figyelték meg rövid idő és alacsony szubsztrátkoncentráció mellett, így ezek a vegyületek hasznosak és érzékenyek a galaktozidázok számára.Az MFMG Michaelis–Menten állandójának (Km) értékének nagysága nagyobb, mint az FMG-é, ami a fluorogén szubsztrát lehetséges konformációs változására utal.Az FMG-vel végzett biotinilezett β-Gal Km értéke alacsonyabb, mint a natív enzimé.Ez a megfigyelés azt jelzi, hogy a biotinilált enzim magasabb szubsztrát-affinitással rendelkezik, mint a natív enzim.A transzlációs diffúziós együtthatókat mind a fluorogén szubsztrátumokra, mind a termékekre vonatkozóan fluoreszcencia korrelációs spektroszkópiával mértük.A fluorogén szubsztrátok és az enzimatikus hidrolízis termékek transzlációs diffúziós együtthatói hasonlóak, 3,5-4,5 × 10-10 m2 s-1 tartományban.Így az enzimatikus kinetika fokozódása vagy késleltetése a szubsztrát és a termék transzlációs mobilitásának különbsége miatt nem olyan nyilvánvaló.