Termékek

Az 5-fluorouracil (5-FU) és két endogén monofoszfát nukleotid számos metabolitjának konkrét mennyiségi meghatározására kifejlesztettünk egy eredeti módszert, amely folyadékkromatográfiás-tandem tömegspektrometrián (LC-MS/MS) alapul.Ez a vizsgálat lehetővé tette a következők meghatározását: (i) 5-fluor-2'-dezoxiuridin-5'-monofoszfát (5-FdUMP) intracelluláris termelődése 5-FU-ból vagy 5-fluor-2'-dezoxiuridinből (5-FdUrd) , (ii) az 5-FdUMP koncentrációjának hatása az intracelluláris 2'-dezoxiuridin-5'-monofoszfát (dUMP)/timidin-5'-monofoszfát (TMP) arányára, és (iii) az 5-FdUMP szekréciós mértéke és 5-FU humán sejtekből ABC transzporterekkel.Kísérleti körülményeink között a sejteket 5-FU-val vagy 5-FUrd-dal inkubáltuk.Ezután a sejtfehérjéket metanollal kicsapták.Ez az eljárás magas extrakciós visszanyerést biztosított.Ezen túlmenően a sejtekből származó 5-FU és 5-FdUMP szekréció mérésére elvégeztük ezen molekulák mennyiségi meghatározását tápközegben.A tápközeget vagy közvetlenül injektáltuk (5-FU), vagy szilárd fázisú extrakciót végeztünk Oasis Wax extrakciós kazettával (5-FdUMP).Az analitok elválasztását egy dC18 Atlantis 3,5 μm, (100 mm × 2,1 mm id) oszlopon végeztük izokratikus móddal, mobil fázisként ammónium-formiát puffer/metanol/víz (5/5/90, v/v) elegyet használva.A futási idő nem haladta meg a 6,2 percet.Az analitokat elektrospray interfészen ionizáltuk negatív ion módban.A módszert a vegyületek szerint 2,5-150 ng mL -1 tartományban validáltuk.Az intra- és inter-assay variabilitás 10%-nál alacsonyabb volt hét napon keresztül.Valamennyi vegyület stabil volt sejtekben vagy tápközegben, ha a mintákat -20 °C-on tároltuk legalább két hétig, és három fagyasztási-olvasztási ciklus után.Mindkét tápközegben nem figyeltek meg mátrixhatást.