Termékek

A fehérje foszforilációja szabályozza a különböző sejtfunkciókat, és kulcsszerepet játszik a növények korai fejlődésében.Az Arabidopsis palánták fehérjefoszforilációjával kapcsolatos korábbi vizsgálatok kiegészítésére és kiterjesztésére egy alternatív megközelítést alkalmaztunk, amely a nem denaturáló körülmények között végzett fehérjeextrakciót kombinálja az érintetlen foszfoproteinek immobilizált fémion-affinitáskromatográfiás (IMAC) dúsításával Rubisco-mentesített kivonatokban, majd azonosítást követett. kétdimenziós gélelektroforézis (2-DE) és folyadékkromatográfiás-tandem tömegspektrometria (LC-MS/MS) alkalmazásával.A gélben végzett tripszin emésztés és a kiválasztott gélfoltok elemzése 144 foszforilált peptidet és maradékot azonosított, amelyek közül csak 18 foszfopeptid és 8 foszfozit található a PhosPhAt 4.0 és P3DB Arabidopsis thaliana foszforilációs hely adatbázisában.A 82 azonosított foszfoprotein több mint fele részt vett a szénhidrát-anyagcserében, a fotoszintézisben/légzésben vagy az oxidatív stresszre adott válaszmechanizmusokban.Az érintetlen foszfoproteinek dúsítása a 2-DE és LC-MS/MS előtt úgy tűnik, hogy javítja a foszforilált treonin és tirozin maradékok kimutatását a peptidszintű dúsítást alkalmazó módszerekkel összehasonlítva, ami arra utal, hogy a két megközelítés valamelyest kiegészíti egymást a foszforilációs hely lefedettsége szempontjából.A fiatal palánták eredményeinek összehasonlítása az érett Arabidopsis levelekkel korábban kapott eredményekkel öt olyan fehérjét azonosított, amelyek eltérően foszforilálódnak ezekben a szövetekben, bizonyítva ezzel a technikával a fehérjefoszforiláció dinamikájának vizsgálatát a növény fejlődése során.