L-Proline Cas: 147-85-3 99% Fehér por
| Katalógus szám | XD90293 |
| termék név | L-prolin |
| CAS | 147-85-3 |
| Molekuláris képlet | C5H9NO2 |
| Molekuláris tömeg | 115.13046 |
| Tárolási részletek | Környező |
| Harmonizált Vámkódex | 29339980 |
Termékleírás
| Próba | 99%perc |
| Kinézet | fehér por |
| Fajlagos forgás | -84,5 - -86 |
| Nehéz fémek | <15 ppm |
| AS | <1 ppm |
| Ph | 5,9 - 6,9 |
| SO4 | <0,050% |
| Fe | <30 ppm |
| Szárítási veszteség | <0,3% |
| Maradék gyújtáson | <0,10% |
| NH4 | <0,02% |
| Cl | <0,050% |
| Megoldás állapota | >98% |
A teljes sejt alapú biokatalitikus folyamatok fejlesztéséhez és optimalizálásához elengedhetetlen a mikrobiális gazdaszervezet metabolizmusának megértése, mivel ez határozza meg a termelés hatékonyságát.Ez különösen igaz a redox biokatalízisre, ahol metabolikusan aktív sejteket alkalmaznak a gazdaszervezetben endogén kofaktor/koszubsztrát regenerációs képesség miatt.Rekombináns Escherichia colit használtunk a prolin-4-hidroxiláz (P4H) túltermelésére, amely egy dioxigenáz, amely a szabad L-prolin transz-4-hidroxi-L-prolinná történő hidroxilezését katalizálja a-ketoglutaráttal (a-KG) koszubsztrátként.Ebben a teljes sejtes biokatalizátorban a központi szén-anyagcsere biztosítja a szükséges koszubsztrát a-KG-t, közvetlenül összekapcsolva a P4H biokatalitikus teljesítményét a szén-anyagcserével és a metabolikus aktivitással.Kísérleti és számítógépes biológiai eszközök, például metabolikus tervezés és (13)C-metabolikus fluxusanalízis ((13)C-MFA) alkalmazásával megvizsgáltuk és kvantitatívan leírtuk a teljes sejtes biokatalizátor fiziológiai, metabolikus és bioenergetikai válaszát. a célzott biokonverzióhoz, és azonosították a lehetséges metabolikus szűk keresztmetszeteket a további racionális útvonaltervezés érdekében. Prolin-degradáció-hiányos E. coli törzset állítottunk elő a prolin-dehidrogenázt kódoló putA gén törlésével.Az ezzel a mutáns törzzsel végzett teljes sejtes biotranszformáció nemcsak kvantitatív prolin-hidroxilációhoz, hanem a fajlagos transz-4-L-hidroxiprolin (hyp) képződési sebességének megduplázódásához is vezetett a vad típushoz képest.A mutáns törzs központi metabolizmusán keresztüli szénáramlás elemzése feltárta, hogy a P4H aktivitás iránti megnövekedett a-KG igény nem növelte az a-KG-t generáló fluxust, ami a vizsgált körülmények között szigorúan szabályozott TCA ciklus működésére utal.A vad típusú törzsben a P4H szintézis és katalízis a biomassza hozam csökkenését okozta.Érdekes módon a ΔputA törzs emellett kompenzálta a kapcsolódó ATP és NADH veszteséget azáltal, hogy csökkentette a fenntartó energiaigényt összehasonlíthatóan alacsony glükózfelvételi sebesség mellett, ahelyett, hogy növelte volna a TCA aktivitást. A rekombináns E. coli BL21(DE3)(pLysS) putA kiütése ígéretes lehet a produktív P4H katalízis számára, nemcsak a biotranszformációs hozam, hanem a biotranszformáció és a prolin felvétel sebessége, valamint az energiaforrásra kifejtett hyp hozama tekintetében is.Az eredmények azt mutatják, hogy a putA-knockout esetén a TCA-ciklus prolin-hidroxilációhoz való kapcsolódása az a-KG koszubsztrátumon keresztül kulcsfontosságú korlátozó tényezővé és célpontjává válik az a-KG-függő biotranszformációk hatékonyságának további javításában.
