hírek

Sok énekeletlen hős van körülöttünk, akik látszólag hétköznapiak, de valójában csendben sokat tesznek velünk.A proteináz K a „nem énekelt hős” a molekuláris diagnosztikai iparban, bár az ipar „nagy és erős” iparához képest a proteináz K annyira visszafogott, hogy már régóta figyelmen kívül hagytuk a fontosságát.Az új koronajárvány kitörésével megugrott a proteináz K iránti kereslet, a hazai és külföldi kínálat pedig messze elmarad a fogyasztástól, és hirtelen mindenki rájött, hogy a proteináz K annyira fontos.
Mire használható a proteináz K
A proteináz K egy szerin-proteáz, proteolitikus enzimaktivitással, és sokféle környezetben képes fenntartani aktivitását (pH (4-12,5), magas sótartalmú puffer, magas, 70°C-os hőmérséklet stb.).Ezenkívül a proteináz K aktivitását nem gátolja az SDS, a karbamid, az EDTA, a guanidin-hidroklorid, a guanidin-izotiocianát stb., és bizonyos mennyiségű mosószer is fokozhatja a proteináz K aktivitását. Orvosi kezelésben (vírus- és mikrobiális fertőtlenítés) ), élelmiszerek (húspuhítás), bőr (hajpuhítás), borkészítés (alkoholos derítés), aminosav készítés (lebomlott toll), nukleinsav extrakció, in situ hibridizáció stb., proteináz K Vannak alkalmazások.A leggyakrabban használt alkalmazás a nukleinsav extrakció.
A proteináz K mindenféle fehérjét képes enzimolizálni a mintában, beleértve azokat a hisztonokat is, amelyek szorosan kötődnek a nukleinsavakhoz, így a nukleinsavak felszabadulhatnak a mintából és kijuthatnak az extraktumba, megkönnyítve az extrakció és a tisztítás következő lépését.A vírusos nukleinsav kimutatásában a proteináz K az egyik fontos komponens a vírusminta-oldatban.A proteináz K feltörheti és inaktiválhatja a vírus köpenyfehérjét, ami biztonságosabb a szállítási és kimutatási szakaszban;emellett a proteináz K is képes lebontani az RNázt, amely megakadályozza a vírus RNS lebomlását és megkönnyíti a nukleinsav kimutatását.
A proteináz K egyik napról a másikra hírneve
Akár a tudományos kutatás, akár az IVD területén a nukleinsav extrakció a legalapvetőbb kísérlet, így a proteináz K mindig is nagyon fontos létező volt.A múltban azonban a proteináz K sokkal kevésbé volt ismert, mint a szerepe.Ennek nagy része az volt, hogy a proteináz K keresleti és kínálati viszonya nagyon stabil volt.Kevesen gondolnák, hogy a proteináz K ellátása gondot okozna.
Az új koronajárvány kitörésével megnőtt a nukleinsav-vizsgálatok iránti igény.2020 júniusának végén Kína közel 90 millió új koronatesztet hajtott végre, és ez a szám globális szinten még riasztóbb.A nukleinsav extrakciós kísérletekben a proteináz K munkakoncentrációja körülbelül 50-200 μg/ml.Általában körülbelül 100 μg proteináz K szükséges egy nukleinsavminta kinyeréséhez.A tényleges használat során a nukleinsav-kivonás hatékonyságának növelése érdekében a Proteináz K-t gyakran megnövelt mennyiségben alkalmazzák.Az új koronavírus nukleinsav-detektálása nagy mennyiségű proteináz K-igényt hozott.A proteináz K eredeti keresleti és kínálati egyensúlya gyorsan felbomlott, és a proteináz K egyik napról a másikra fontos járványmegelőzési anyag lett.
A proteináz K termelésének nehézségei
Bár a járvány kialakulásával az emberek felértékelték a proteináz K fontos értékét, kínos, hogy a proteináz K túlzott visszafogottsága miatt kevés hazai vállalat vett részt a proteináz K előállításában. proteináz K termelést akarnak létrehozni Az előállítási folyamat során kiderült, hogy a proteináz K egy rendkívül különleges fehérje.Rendkívül nagy kihívást jelent a proteináz K termelési kapacitásának rövid időn belüli bővítése.
A proteináz K nagy léptékű előállítása a következő nehézségekkel néz szembe
1. Alacsony kifejezés
A proteináz K nem specifikusan képes lebontani a legtöbb fehérjét, és komoly toxicitást okozhat az expressziós gazdasejtben.Ezért a proteináz K expressziós szintje általában nagyon alacsony.A proteináz K-t erősen expresszáló expressziós rendszerek és törzsek szűrése általában hosszabb ciklust igényel.
2. Pigment- és nukleinsavmaradékok
A nagy léptékű fermentáció nagy mennyiségű pigment- és gazdanukleinsav-maradékot visz be.Ezeket a szennyeződéseket nehéz egyszerű tisztítási eljárással eltávolítani, a komplex tisztítás pedig növeli a költségeket és csökkenti a visszanyerési sebességet.
3. Instabilitás
A proteináz K nem elég stabil, önmagát képes enzimolizálni, 37°C-on nehéz hosszú ideig stabilan tárolni védőanyag nélkül.
4. Könnyen kicsapható
A proteináz K fagyasztva szárított porának elkészítésekor annak biztosítása érdekében, hogy a proteináz K szilárdanyag-tartalma nagy legyen a fagyasztva szárított porban, fagyasztva szárított védőanyag hozzáadása szükséges nagy koncentrációban, de amikor A proteináz K koncentrációja eléri a 20mg/mL-t és afelettit, könnyű Az aggregáció csapadékot képez, ami nagy nehézségeket okoz a magas szilárdanyag tartalmú proteináz K fagyasztva szárításában.
5. Nagy beruházás
A proteináz K erős proteázaktivitással rendelkezik, és laboratóriumban képes hidrolizálni más proteázokat.Ezért a proteináz K speciális termelési területeket, berendezéseket és személyzetet igényel a kutatáshoz, fejlesztéshez és gyártáshoz.
XD BIOCHEM proteináz K oldata
XD BIOCHEM has a mature protein expression and purification platform, and has rich experience in the expression and purification of recombinant proteins and optimization of production processes. Through the rapid formation of a research and development team, the large-scale production process of proteinase K has been overcome. The monthly output of freeze-dried powder is more than 30 KG. The product has stable performance, high enzyme specific activity, and no host cytochrome and nucleic acid residues. Welcome to contact XD BIOCHEM Obtain a trial package (E-mail: sales@xdbiochem.com Tel: +86 513 81163739).
Az XD BIOCHEM műszaki megoldásai közé tartozik
Többkópiás plazmidintegrációt alkalmazva 8 g/l expressziós szinttel rendelkező, magas expressziójú törzseket választunk ki, ami megoldja a proteináz K alacsony expressziós szintjének problémáját;
Egy többlépcsős tisztítási folyamat kialakításával a proteináz K gazdaszervezet citokróm- és nukleinsavmaradékait sikeresen eltávolították a standard érték alatt;
A védőpufferkészítmények nagy áteresztőképességű szűrésével olyan puffert választottak ki, amely stabilan képes tárolni a proteináz K-t 37 °C-on;
A szűrőpufferek áthidalják azt a problémát, hogy a proteináz K könnyen aggregálható és nagy koncentrációban kicsapódik, és megalapozza a proteináz K magas szilárdanyag-tartalmú fagyasztva szárítását.

XD BIOCHEM proteináz K minta

XD BIOCHEM proteináz K stabilitási teszt: szobahőmérsékleten 80 nap után nem lesz jelentős változás az aktivitásban

XD BIOCHEM proteináz K stabilitási teszt: szobahőmérsékleten 80 nap után nem lesz jelentős változás az aktivitásban

Az XD BIOCHEM proteináz K és a versengő termékek nukleinsav extrakciós hatásának összehasonlítása.A nukleinsav extrakció során az XD BIOCHEM-et, illetve a kompetitív proteináz K-t alkalmazzák.Az XD BIOCHEM proteináz K extrakciós hatékonysága magasabb, a célgén Ct értéke pedig alacsonyabb.