Termékek

Új, nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás vizsgálati eljárás glikoziltranszferázokhoz, antranilsavval történő származékképzésen és fluoreszcencia detektáláson alapul.

A 2-amino-benzoesav (2AA; antranilsav, AA) egyedi jelölési kémiájának felhasználásával a β1-4 galaktozil-transzferáz (GalT-1) és az α2-6 szialiltranszferáz (ST-6) aktivitásának mérésére nagy teljesítményű folyadékkal készült vizsgálatokat végeztek. kromatográfia (HPLC) fluoreszcencia detektálással (Anumula KR. 2006. A fluoreszcens derivatizálási módszerek fejlődése glikoprotein szénhidrátok nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás analíziséhez. Anal Biochem. 350:1-23).Az N-acetil-glükózamint (GlcNAc) és az N-acetil-laktózamint akceptorként, az uridin-difoszfát (UDP)-galaktózt és a citidin-monofoszfát (CMP)-N-acetil-neuraminsavat (NANA) pedig a GalT-1 és az ST-6 donorként használtuk.Az enzimatikus termékeket in situ AA-val jelöltük, és normál fázisú körülmények között TSKgel Amide 80 oszlopon elválasztottuk a szubsztrátumoktól.Az enzimegységeket a csúcsterületekből az egyidejűleg derivatizált Gal-β1-4GlcNAc és NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc standardokkal összehasonlítva határoztuk meg.Megállapították a linearitást (idő és enzimkoncentráció), a precizitást (intra- és interassay) és a reprodukálhatóságot a vizsgálatokhoz.A vizsgálatok hasznosnak bizonyultak az enzimaktivitások követésében az izolálás és a tisztítás során.A vizsgálatok nagyon érzékenyek voltak, és a hagyományos radioaktív cukor alapú mérésekkel megegyező vagy jobb eredményeket értek el.A vizsgálati formátum más transzferázok aktivitásának mérésére is használható, feltéve, hogy a szénhidrát akceptorok redukáló véget tartalmaznak a jelöléshez.A glikoprotein akceptorok vizsgálatát IgG alkalmazásával fejlesztették ki.Az IgG glikánok (biantennás G0, G1, G2, mono- és disialilált) elválasztására egy rövid HPLC profilalkotási módszert dolgoztunk ki, amely lehetővé tette a GalT-1 és ST-6 aktivitások gyors meghatározását.Ezenkívül ez a profilalkotási módszer hasznosnak bizonyulhat az IgG-glikánok változásainak klinikai körülmények között történő nyomon követésére.