Termékek

Más pozitív szálú RNS-vírusokhoz hasonlóan a tombusvírusokat is a membránhoz kötött virális replikáz komplex (VRC) replikálja.A VRC a p92 vírus által kódolt RNS-dependens RNS polimerázból (RdRp), a vírus p33 RNS chaperonjából és számos kooptált gazdafehérjéből áll.Ahhoz, hogy transzlációja után funkcionális RdRp legyen, a p92 replikációs fehérjét be kell építeni a VRC-be, majd aktiválni kell.Korábban egy sejtmentes élesztőkivonat-alapú vizsgálattal kimutattuk, hogy a Tomato bushy stunt virus (TBSV) RdRp aktiválásához oldható gazdafaktor(ok)ra van szükség.Ebben a cikkben a celluláris hősokk-fehérjét, a 70-et (Hsp70) azonosítjuk az N-terminálisan csonkolt rekombináns TBSV RdRp aktiválásához szükséges kooptált gazdafaktorként.Ezenkívül a Hsp70 funkció kismolekulákon alapuló blokkolása in vitro gátolja a tombusvírus RdRp RNS szintézisét.Továbbá kimutattuk, hogy a semleges foszfolipidek, nevezetesen a foszfatidil-etanol-amin (PE) és a foszfatidil-kolin (PC ), fokozzák az RdRp aktivációt in vitro.Ezzel szemben a foszfatidilglicerin (PG) erős és domináns gátló hatást mutat az in vitro RdRp aktivációra.Azt is kimutattuk, hogy a PE és a PC stimulálja az RdRp-vírus pluszszálú RNS [(+)RNS] kölcsönhatását, míg a PG gátolja a virális RNS kötődését az RdRp-hez.A különböző foszfolipideknek a tombusvírus RdRp aktiválásában betöltött stimuláló és gátló szerepe alapján azt javasoljuk, hogy a megcélzott szubcelluláris membránok lipidösszetételét a tombusvírusok felhasználhassák az új VRC-összeállítás szabályozására a fertőzés során. A vírus által kódolt RNS-függő RNS polimeráz Az RdRp, amely számos pozitív szálú RNS-vírus fertőzött sejtjeiben felelős a vírus RNS utódainak szintéziséért, kezdetben inaktív.Ezzel a stratégiával valószínűleg elkerülhető a vírus RNS szintézise a citoszolban, ami gyorsan RNS által kiváltott sejtes antivirális válaszok indukciójához vezetne.A membránhoz kötött replikáz komplex összeállítása során a vírus RdRp aktiválódik egy nem teljesen ismert folyamat révén, amely az RdRp-t képessé teszi az RNS szintézisére.A TBSV RdRp használatával megmutattuk, hogy a kooptált sejtes Hsp70 chaperon és a semleges foszfolipidek elősegítik az RdRp aktiválását in vitro.Ezzel szemben a foszfatidilglicerin (PG) domináns gátló hatást fejt ki az in vitro RdRp aktivációra és az RdRp-vírus RNS kölcsönhatásra, ami arra utal, hogy az RdRp-t körülvevő membrán mikrodomén nagymértékben befolyásolja annak RNS szintézis képességét.Így a vírus RdRp aktiválása valószínűleg a fertőzött sejtekben lévő több gazdakomponenstől függ.