Termékek

1. A metabolit profilalkotási módszerek fontos eszközök a biológiai rendszerek metabolitkészleteinek mérésére.Míg a legtöbb metabolitprofil-meghatározási módszer relatív intenzitásról számol be, vagy néhány belső standardtól függ, amelyek az összes metabolitot reprezentálják, a biológiai sejtekben és folyadékokban lévő metabolitkészlet kvantitatív leírásának végső követelménye az abszolút koncentráció meghatározása.Itt bemutatunk egy nagy áteresztőképességű és érzékeny gázkromatográfiás/tandem tömegspektrometriás (GC/MS/MS) célzott metabolitprofil-módszert, amely lehetővé teszi az összes kimutatott metabolit abszolút mennyiségi meghatározását.A módszer a metil-klór-hangyasav-származékképzésen és a deuterált derivatizáló reagensekkel külön derivatizált metabolit standardokkal végzett minták mennyiségi meghatározásán alapul.A hagyományos elektronütéses ionizációt felváltja a pozitív kémiai ionizáció, mivel az utóbbi sokkal nagyobb mértékben őrzi meg a molekulaiont és más nagy molekulatömegű fragmentumokat.Ez megkönnyítette az egyedi MS/MS átmenetek kiválasztását a számos együtt eluáló metabolit közül.Jelenleg az új GC/MS/MS módszer 67 általánosan elterjedt elsődleges metabolitot tartalmaz, amelyek többsége az amino- és nem-aminosavak csoportjába tartozik.Megmutatjuk a módszer alkalmazhatóságát vizelet- és szérummintákon.A módszer jelentős továbbfejlesztése az aminosavak és nem-amino-szerves savak kvantitatív GC/MS metabolitprofiljának jelenlegi módszertanának.

A 2,24S-hidroxikoleszterin (24OHC) és a 27-hidroxikoleszterin (27OHC) két szerkezetileg hasonló, eltérő eredetű oxiszterin – az előbbi szinte kizárólag az agyban, az utóbbi pedig kisebb mértékben képződik az agyban, mint a legtöbb más szervben.TESZTELENDŐ HIPOTÉZIS: Az idegsejtek károsodása és/vagy demyelinizációja megnövekedett 24OHC-áramlást okoz az agyból a cerebrospinális folyadékba (CSF), míg a defektus vér-agy gát a keringésből a cerebrospinalis folyadékba (CSF) fokozott 27OHC-áramlást okoz.Izotóphígítási tömeg A két oxiszterol CSF-ben és plazmájában történő meghatározására spektrometriát használtunk több mint 250, különböző neurológiai és időskori betegségben szenvedő beteg esetében. A két oxiszterol CSF-szintjét sokkal jobban befolyásolták a különböző betegségek, mint a plazmaszinteket.Az aktív demyelinisatiós betegségben szenvedő betegeknél megemelkedett a 24OHC szintje a CSF-ben, viszonylag magas 24OHC/27OHC aránnyal.Az agyhártyagyulladásban szenvedő betegeknél általában mindkét szteroid magas szintje volt alacsony 24OHC/27OHC aránnyal.Az Alzheimer-kórban szenvedő betegeknél a 24OHC-szint enyhén emelkedett a cerebrospinalis folyadékban, míg a 27OHC-szint kevésbé.A sclerosis multiplexben szenvedő betegek hajlamosak voltak magasabb 24OHC-szintre az aktív időszakokban, magas 24OHC/27OHC arány mellett. A két oxiszterol CSF-ben és plazmában történő mérése jelentősen hozzájárulhat a neurológiai betegségek értékelésének meglévő biokémiai módszereihez.