Termékek

A colicin E1 csatorna domén membrán topológiáját fluoreszcens rezonancia energiatranszfer (FRET) segítségével vizsgáltuk.A FRET egy genetikailag kódolt fluoreszcens aminosavat (kumarint) tartalmazott donorként, és egy szelektíven jelölt ciszteint, amelyhez DABMI (4-(dimetilamino)fenilazofenil-4'-maleimid) volt kötve, mint FRET akceptor.A fluoreszcens kumarin maradékot egy ortogonális tRNS/aminoacil-tRNS szintetáz páron keresztül építették be a fehérjébe, amely lehetővé tette a szelektív beépülést a colicin csatorna doménjének bármely helyére.Mindegyik változat tartalmazott egy stop (TAG) mutációt a kumarin beépüléshez és egy cisztein (TGT) mutációt a DABMI kapcsolódáshoz.Az 1-6. hélixen belül hat interheliális távolságot határoztunk meg FRET analízissel mind az oldható, mind a membránhoz kötött állapotra.A FRET adatok nagy változásokat mutattak a 3-6. hélixek közötti interhelikális távolságokban a membrán asszociáció hatására, új betekintést nyújtva a csatorna domén membránhoz kötött szerkezetébe.Általánosságban elmondható, hogy a kumarin-DABMI FRET interhelikális hatékonysága csökkent a membránkötéskor, a colicin csatorna ernyőmodelljére építve.A jelenlegi és korábban publikált FRET adatok alapján egy kísérleti modellt dolgoztunk ki a csatornatartomány zárt állapotára.A modell az 1-7 hélixek körkörös elrendezését javasolja az óramutató járásával megegyező irányban az extracelluláris oldalról, és az 1., 6., 7. és 10. hélixek membrán határfelületi társulását a 8. és 9. hélixek által alkotott központi transzmembrán hajtű körül.