Termékek

A cirrhoticus májbetegségek, például a hepatitis C vírus (HCV), az autoimmun hepatitis (AIH) és a primer biliaris cirrhosis (PBC) patogén molekuláris útvonalai rosszul jellemezhetők.A differenciálisan kifejeződő gének gyakran fontosak a betegség patogenezisében.A szuppressziós szubtraktív hibridizáció (SSH) egy genomszintű megközelítés, amely gazdagítja a differenciálisan expresszált mRNS transzkriptumokat.Célunk volt, hogy új megfigyeléseket készítsünk a differenciált génexpresszióról cirrhosisban SSH és kvantitatív valós idejű reverz transzkriptáz polimeráz láncreakció (RT-PCR) kombinálásával.A májtranszkriptomokat HCV cirrhosisban, AIH cirrhosisban, PBC-ben és nem beteg májszövetben SSH-val vizsgáltuk.A kapott komplementer DNS (cDNS) klónokat dot-blot hibridizációval újraszűrtük differenciális expresszióra, majd szekvenáltuk.A kiválasztott génexpressziót valós idejű RT-PCR-rel határoztuk meg.Az SSH-t követően 694 klónt szűrtünk újra differenciális génexpresszióra, amelyek közül 145-öt szekvenáltunk, és kiderült, hogy 89 különböző génből származik.Hét klón csak expresszált szekvencia tag (EST) szekvenciákkal volt homológ, amelyek nem ismert funkciójú géneket kódolnak.Négy gén fokozott expresszióját igazoltuk valós idejű RT-PCR-rel: transzmembrán 4 szupercsalád 3-as tagja (tetraspanin CO-029) a cirrhosis minden formája esetén, hedgehog interacting protein (HIP) AIH cirrhosisban és kitináz 3-like-1 (HC gp-39 vagy ykl-40) és arginin-glutaminsav ismétlődés (RERE) HCV cirrhosisban.A RERE gén polimorfizmusait és splice variánsait minden vizsgált szövetben megfigyelték.A tetraspanin CO-029 upregulációja elsősorban az epevezeték sejtjeiben volt lokalizálva.Összefoglalva, a humán cirrhosisban a differenciált génexpresszió újszerű megfigyelései történtek az SSH mint elsődleges felfedezési eszköz használatával.Különösen indokolt a RERE gén és termékeinek további vizsgálata a HCV-vel összefüggő májbetegségben.