Termékek

A DNS-bázisok oxidatív károsodása általában oxidált purinok, különösen a 7,8-dihidro-8-oxoguanin (8-oxoG) és a 7,8-dihidro-8-oxoadenin (8-oxoA) képződését eredményezi, az előbbi jó ismert mutagén elváltozás.Mivel a 8-oxoG a normál bázisokhoz képest könnyen ki van téve további oxidációnak, a DNS-szintézis során a 8-oxoG oxidált formájával szemben egy bázis inszercióját vizsgálták in vitro.Az egyetlen 8-oxoG léziót tartalmazó szintetikus templátot először különböző egyelektronos oxidálószerekkel vagy szingulett oxigén körülmények között kezeltük, majd Klenow fragment exo- (Kf exo-), borjú csecsemőmirigy DNS polimeráz alfa (pol alfa) által katalizált primer kiterjesztésének vetettük alá. ) vagy humán DNS polimeráz béta (pol béta).A korábbi jelentésekkel összhangban a dAMP és a dCMP szelektíven a 8-oxoG-vel szemben van beépítve mindhárom DNS-polimerázzal.Érdekes módon a 8-oxoG oxidációja dAMP és dGMP inszerciót indukál a lézióval szemben a Kf exo- által, a primer kiterjesztésének átmeneti gátlásával a módosított bázis helyén.Ezenkívül a lézió blokkot képez a pol-alfa és pol-béta DNS-szintézis során.A 8-oxoA-val módosított templát-oligonukleotiddal végzett kísérletek azt mutatják, hogy mind a 8-oxoA, mind a 8-oxoA oxidált formája a dTMP Kf exo- által történő közvetlen beépítését.A 8-oxoG-t tartalmazó oligonukleotidok tömegspektrometriás analízise az IrCl62-vel végzett oxidáció előtt és után elsősorban a 8-oxoG hely oxidációjával van összhangban, ami egy guanidinohidantoin-rész képződését eredményezi fő termékként.Nem találtunk bizonyítékot a bázisos helyek kialakulására.Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a 8-oxoG oxidált formája, esetleg guanidinohidantoin, a dNTP-k félreolvasását és téves beillesztését irányíthatja a DNS-szintézis során.Ha egy ilyen folyamat in vivo játszódik le, az egy pontmutagén léziót jelentene, amely G-->T és G-->C transzverziókhoz vezet.A 8-oxoA megfelelő oxidált formája azonban elsősorban a T helyes inszercióját mutatja a Kf exo- DNS-szintézis során.